Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Антибиотики методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Антибиотики методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ n По происхождению: Способ получения • • Природные (биосинтетические) Продуцент • Собственно бактерии Примеры • • • Актиномицеты • • • Полусинтетические (комбинация биосинтеза и химического синтеза Синтетические Стрептомицин, эритромицин, тетрациклины и др.

Грибы • • Грамицидин С, полимиксин • • Продукты модификации молекул природных антибиотиков Аналоги природных антибиотиков, синтезированных химическим путем • • Бензилпенициллин, цефалоспорины, фузидиевая кислота Оксациллин, ампициллин, гентамицин, рифампицин и др.

Левомицетин, амикацин

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ n n n n По спектру антимикробной активности: Антибактериальные Противогрибковые Антипротозойные По типу действия: бактерицидные — необратимо связываются с клеточными мишенями, вызывая гибель чувствительных к ним микроорганизмов.

(пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, рифампицин, полимиксины и др.

); бактериостатические — ингибируют рост и размножение микробных клеток, но при удалении антибиотика жизнедеятельность возбудителей восстанавливается (макролиды, тетрациклины, линкомицин, хлорамфеникол и др. ).

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ По спектру действия: n с преимущественным действием на грамположительные микроорганизмы (линкозамиды, биосинтетические пенициллины, цефалоспорины 1 -го поколения, макролиды, ванкомицин, линкомицин); n с преимущественным действием на грамотрицательные микроорганизмы (монобактамы, циклические полипептиды, цефалоспорины 3 -го поколения); n широкого спектра действия (аминогликозиды, левомицетин, тетрациклины, полусинтетические пенициллины широкого спектра действия (ампициллин, азлоциллин и др. ) и цефалоспорины 2 го поколения). n Противотуберкулезные антибиотики (стрептомицин, рифампицин, флоримицин). n Противогрибковые антибиотики (нистатин, леворин, гризеофульвин, амфотерицин В, кетоконазол, анкотил, дифлюкан и др. ).

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ • • выделяют антибиотики первой очереди (пенициллины, макролиды, аминогликозиды), второй очереди (цефалоспорины, полусинтетические аминогликозиды, аугментин и пр. ) и резервные (фторхинолоны, карбопенемы). Выделяют антибиотики короткого и пролонгированного действия.

Так, для поддержания бактерицидной концентрации в плазме пенициллин следует вводить каждые 4 часа, а роцефин (цефалоспорин 3 поколения) — 1 раз в сутки. По токсичности разделяют ото-, нефро-, гепато-, нейротоксичные и т. д. Выделяют антибиотики со строго регламентированной дозой применения (линкозамины, аминогликозиды и пр.

) и препараты, дозу которых можно увеличивать в зависимости от выраженности инфекционного процесса (пенициллины, цефалоспорины ).

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ по химическому строению широко применяется в медицинской среде Бета-лактамные антибиотики, 2 подгруппы: Пенициллины — вырабатываются колониями плесневых грибов рода Penicillium; Цефалоспорины — обладают схожей структурой с пенициллинами. Используются по отношению к пенициллинустойчивым организмам. n.

Макролиды — антибиотики со сложной циклической структурой. Действие — бактериостатическое. n. Тетрациклины — используются для лечения инфекций дыхательных и мочевыводящих путей, лечения тяжелых инфекций типа сибирской язвы, туляремии, бруцеллёза. Действие — бактериостатическое. n. Аминогликозиды — обладают высокой токсичностью.

Используются для лечения тяжелых инфекций (перитонитов). Действие-бактерицидное. n

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ по химическому строению Левомицетины — Использование ограничено по причине повышенной опасности серьезных осложнений — поражении костного мозга, вырабатывающего клетки крови. Действие — бактерицидное. n.

Гликопептидные антибиотики нарушают синтез клеточной стенки бактерий. Оказывают бактерицидное действие, однако в отношении энтерококков, некоторых стрептококков и стафилококков действуют бактериостатически. n.

Линкозамиды оказывают бактериостатическое действие, которое обусловлено ингибированием синтеза белка рибосомами. В высоких концентрациях в отношении высокочувствительных микроорганизмов могут проявлять бактерицидный эффект. n.

Противогрибковые — разрушают мембрану клеток грибов и вызывают их гибель. Действие — литическое. Постепенно вытесняются высокоэффективными синтетическими противогрибковыми препаратами. n

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ ПО МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ Ингибиторы синтеза клеточной стенки ингибирование синтеза пептидогликана (пенициллин, цефалоспорин, монобактамы).

Такие антибиотики обладают бактерицидным действием и не убивают покоящиеся клетки и клетки, лишенные клеточной стенки.

n Нарушающие функцию мембран клетки нарушение целостности мембраны, образование ионных каналов, связывание ионов в комплексы, растворимые в липидах, и их транспортировка. Подобным образом действуют нистатин, грамицидины, полимиксины. n

КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ ПО МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ Ингибиторы синтеза белка на рибосомах. ингибирование активации и переноса аминокислот, функций рибосом (стрептомицин, тетрациклин, пуромицин).

n Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот связывание с ДНК и препятствование продвижению РНК-полимеразы (актидин), сшивание цепей ДНК, что вызывает невозможность её расплетания (рубомицин), ингибирование ферментов.

n Ингибирование работы дыхательных ферментов (антимицины, олигомицины, ауровертин). n

Под действием антибактериальных препаратов микроорганизмы подвергаются изменениям, приобретая новые свойства, такие как устойчивость к антибиотикам (антибиотикорезистентность).

Антибиотикорезистентность возникает спонтанно вследствие мутаций, закрепляясь в популяции, является причиной появления устойчивости.

n Во избежание реакций со стороны макроорганизма и микроорганизмов необходимо соблюдать принципы рациональной антибиотикотерапии, важнейшим из которых является определение чувствительности (резистентности) микроорганизмов к назначаемым антибактериальным препаратам. n

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам диффузионные методы: с использованием дисков с антибиотиками n с помощью Е-тестов n методы разведения: nразведение в жидкой питательной среде (бульоне) n разведение в агаре

Принцип диско-диффузионного метода определения чувствительности к антибиотикам Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Чашки инкубируют при 37 О С в течение суток. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. По диаметру зон задержки роста культуры судят о ее чувствительности-устойчивости к соответствующим антибиотикам.

Размещение дисков с антибиотиками на чашку Петри

Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом (метод бумажных дисков)

Быстрее и удобнее использовать диспенсер для дисков

Работа с диспенсером

Чтение результатов

Октодиски

Измерение зон ингибирования антибиотиками с помощью Proto.

COL 2 Zone Функциональные возможности: — Автоматический учет и анализ результатов — Архивирование данных — Выдача результатов на бланке — Автоматическое определение зон ингибирования роста тест — штамма при изучении активности антибиотиков в сырье, фарм. препаратах, а также биологически активных веществ на стадии доклинических испытаний — Автоматический пересчет числа колоний бактерий с учетом разведения пробы

Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов Аналогично тестированию диско-диффузионным методом.

Отличие — вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной.

В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

M. I. C. Evaluator (M. I. C. E. ™) полоски

Определение чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК) или минимальной ингибирующей концентрацией (МИК)

Источник: http://present5.com/antibiotiki-metody-opredeleniya-chuvstvitelnosti-mikroorganizmov-k-antibiotikam/

Расшифровка чувствительности к антибиотикам: о чем говорит анализ?

Анализы на чувствительность к антибиотикам в медицине называют бактериальным посевом. Эти методы позволяют определить возбудителя заболевания и его концентрацию в организме. Цель анализа – выявить в полученном материале вредные микроорганизмы, чтобы в дальнейшем решить задачи насчет специфического лечения.

Выделив микроорганизмы, проводят антибиотикограмму – определение чувствительности обнаруженных микробов к бактериофагам и антибактериальным препаратам.

Методы лабораторного определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Содержание статьи

Метод отличается высокой специфичностью – не наблюдается перекрестных ложных реакций. Есть возможность исследовать любую биологическую жидкость. Проводится он в целях определения чувствительности выявленного микроба к лечебным средствам, что позволяет применять самую эффективную терапию.

Недостатки

Результат получают не сразу. Требования к забору материала высокие. Персонал лаборатории должен быть высококвалифицированным.

Показания для бактериологического посева

Этим методом широко пользуются в медицинской практике, особенно при инфекционных заболеваниях, в гинекологии, хирургии, урологии, онкологии, отоларингологии и пр.

Абсолютным показанием являются любые воспалительные заболевания органов и систем, подозрение на сепсис.

Материал для исследования

Исследовать могут следующие материалы: слизь из зева, носоглотки, цервикального канал, уретры; мокроты; кал; урину; кровь; секрет простаты; грудное молоко; желчь; спинномозговую жидкость; содержимое кист; раневое отделяемое.

Слизь из носа и зева может содержать: гемолитические стрептококки, пневмококки, золотистый стафилококк, коринобактерии дифтерии, менингококк, гемофильную палочку, листерии.

В кале могут выделить:

  • кишечную группу бактерий – сальмонеллы, шигеллы, иерсинии;
  • тифопаратифозную группу;
  • условно-патогенных возбудителей кишечных инфекций;
  • анаэробных микробов; возбудителей пищевых инфекций;
  • обследовать на дисбактериоз кишечника.

В биопунктате, гнойном отделяемом и содержимом ран выделяют:

  • псевдомонады;
  • синегнойные палочки.

Урогенитальную слизь исследуют так:

  • на наличие возбудителей половых инфекций – гонококк, грибы, трихомонады, уреаплазму, листерии, микоплазму;
  • на бактериальную флору.

Кровь могут исследовать на стерильность. Грудное молоко, секрет простаты, мочу, мазки, раневое отделяемое, суставная жидкость, желчь – эти материалы могут быть обследованы на обсемененность (бактериальную флору).

Собранный материал помещают в специальные среды. В зависимости от необходимого результата посев делают в разные среды. К примеру, в избирательная или элективная среда, примером которой является свернутая лошадиная сыворотка для обнаружения возбудителя дифтерии или же среда с солями желчных кислот/селенитом для определения возбудителя кишечных инфекций.

Другой вариант – дифференциально-диагностические среды, которые применяют для расшифровки бактериальных культур.

Если есть необходимость, делают пересев с жидкой на твердую питательную среду, чтобы идентифицировать колонии.

После этого питательную среду помещают в термостат, где создают благоприятные условия для жизнедеятельности возбудителей заболеваний. При этом задают конкретное время, влажность и температуру.

После извлечения образца из термостата проводят контрольный осмотр выросших колоний микробов (культура микроорганизмов). Если есть необходимость, проводится микроскопия полученного материала со специальной окраской. Контрольный осмотр – оценка формы, цвета, плотности колоний.

В заключение проводится подсчет возбудителей. В лабораторной практике используется понятие колониеобразующая единица (КОЕ) – одна микробная клетка, которая способна образовать колонию, или же видимая колония микробов. Показатель КОЕ позволяет определить количество микробов в образце или определить их концентрацию. Подсчет КОЕ может проводиться разными методами.

Качество теста зависит от нескольких факторов, включая соблюдение правил при заборе материала для исследований. Посуда и инструменты должны быть стерильными! В противном случае происходит контаминация (происходит обсеменение бактериями, не имеющих клинического значения), что делает тест бессмысленным.

Если человек принимает антибиотики, посев не будет точным. Прием таковых нужно прекратить за 10 суток до предполагаемой даты анализа. Также нужно сообщить лечащему врачу о приеме любых медикаментозных средств.

Доставка в лабораторию должна быть очень быстрой, не допускается высыхание материала и изменение его кислотности.

К примеру, кал нужно доставлять в теплом виде.

  1. Забор мочи проводится после утренних гигиенических процедур. Собирают среднюю порцию урины. Объем мочи – 10-15 мл. посуда должна быть стерильной. В лабораторию ее нужно доставить за 2 часа;
  2. Если назначен мазок из носа или зева: нельзя чистить зубы, полоскать рот/нос дезинфекторами, есть и пить;
  3. Забор кала проводят утром стерильной лопаткой в такую же посуду. Объем – 15-30 г. Не допускается попадание в него мочи. Максимальное время доставки – 5 часов. Не допускается замораживание. Кал собирают без слабительных и клизм;
  4. Кровь берут до антибиотикотерапии. Минимальное количество – 5 мл для детей, не меньше 15 мл взрослым;
  5. Проба мокрот берется утром натощак. Предварительно полощут рот и чистят зубы. Доставляют в лабораторию максимум за 1 час;
  6. Грудное молоко собирают после водных процедур. Кожу около соска обрабатывают спиртом. Сцеживают 15 мл молока, затем последующие 5 мл выдавливают в стерильный контейнер. Доставляют его за 2 часа;
  7. Мазок половых органов: забор осуществляют минимум через 14 с момента окончания менструаций, не раньше месяца после курса антибиотиков. Не мочиться на протяжении 2 часов женщинам и 5-6 часов до пробы мужчинам.

Данный анализ проводят с целью определения аллергии у человека на конкретный медикамент. Это позволяет после выявления бактерий и определения их чувствительности к антибиотику подобрать лечение. Но если у человека имеются какие-либо противопоказания к таким лекарствам, проводится внутрикожная проба, чтобы снизить риск развития побочных реакций.

Результат исследования слизи из носоглотки готов спустя 5-7 суток, испражнения – 4-7, урогенитальный соскоб– 7, посев на общую флору – 4-7, кровь на стерильность – 10.

Учитывают качество и количество, то есть сам факт наличия микробов, так и их концентрацию. Расшифровка результатов проводится очень простым методом.

В исследуемом материале выделяют несколько степеней роста микроорганизмов (обсемененность).

  • Первая степень – рост отсутствует;
  • вторая степень – рост на твердой среде до 10 колоний;
  • третья – до 100;
  • четвертая – больше 100 колоний.

Результаты очень важны при выявлении условно-патогенной микрофлоры, так как 1 и 2 степени не считаются причинами заболевания, а просто свидетельствуют о загрязненности исследуемого материала, однако 3 и 4 степень указывают на причину воспаления. При выделении патогенной флоры учитывают абсолютно все колонии.

Результаты подсчета КОЕ/мл расшифровывают следующим методом:

  • 103/мл – одна колония;
  • 104/мл – от одной до пяти;
  • 105/мл – от 5;
  • 106/мл – больше 15.

Количество колоний важно для определения степени патологии и контроля проводимой терапии.

Читайте также:  Метронидазол антибиотик или нет

Важной составляющей диагностики и лечения является определение чувствительности возбудителя к антибактериальным препаратам. Набор антибиотиков, к которому резистентный или чувствителен возбудитель, называют антибиотикограммой.

Чувствительность микроорганизма – это когда антибиотик подавляет его размножение. Резистентность – это устойчивость бактерии, то есть лекарство никак на нем не отразится.

Антибиотикограмма выдается в конкретных единицах измерения – минимальной ингибитирующей концентрации (МИК).

Как видите, исследованием данного вопроса может заниматься искючительно пофильный специалист. Здоровья вам и хорошего самочувствия!

Видео: Расшифровка чувствительности к антибиотикам: о чем говорит анализ?

Источник: https://mjusli.ru/krasota_i_zdorove/jeto_polezno/chuvstvitelnosti-k-antibiotikam

Антибиотики

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам

Культуральное бактериологическое исследование (посев на питательные среды,  бак.посев) позволяет получить непосредственно культуру микроорганизма – возбудителя данной инфекции.

Выделив культуру, ее можно во-первых точно идентифицировать (определить вид микроба), а во-вторых определить ее чувствительность к лекарственным препаратам – антибиотикам (антибактериальным препаратам) и бактериофагам.

Этот тест (определение антибиотикочувствительности, «подтитровка антибиотиков» ) имеет важнейшее значение для последующего лечения, т.к. позволяет выбрать препарат, максимально подходящий для лечения конкретного возбудителя.

Необходимость такого анализа связана с тем, что даже бактерии одного вида, но выделенные от разных животных (разные штаммы) могут отличаться по спектру чувствительности.

Сегодня выпускаются десятки наименований антибиотиков (АБ), относящиеся по своему строению к различным группам. Например, для лечения стафилококка могут применяться препараты как минимум девяти фармакологических групп, каждая из которых включает несколько наименований.

Выбрать из них оптимальный для лечения конкретного возбудителя – непростая задача, решить которую невозможно без определения антибиотикочувствительности.

Характерная особенность современных возбудителей – частая встречаемость высокоустойчивых (мультирезистентных) штаммов микроорганизмов. Они проявляют устойчивость к действию различных групп антибиотиков – одной или сразу нескольких.

Например, грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae (к ним относятся такие распространенные возбудители как Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa) образуют ферменты БЛРС – беталактамазы расширенного спектра.

Эти ферменты нейтрализуют действие бета-лактамных антибиотиков (пенициллинов и цефалоспоринов). У штаммов стафилококков также существует механизм резистентности, маркерным признаком которого является устойчивость к метициллину.

МРС – метициллинрезистентные стафилококки – проявляют устойчивость ко всем бета-лактамным антибиотикам. Среди энтерококков растет количество полирезистентных штаммов, устойчивых в том числе и к ванкомицину (препарату выбора).

В ходе бактериологического исследования в компетентных лабораториях у микроорганизмов проводят определение указанных маркеров резистентности, и дают результаты в заключении.

Это дает информацию лечащему врачу, антибиотики каких групп будут эффективны, какие будут бесполезны.

В лабораторной практике нередки случаи, когда возбудитель устойчив почти ко всем протестированным антибиотикам, за исключением 1-2 препаратов.

Определение чувствительности к антибиотикам обычно проводят диско-диффузионным методом, используя стандартизованные питательные среды и стандартизованные диски с антибиотиками.

Используют как минимум два набора антибиотиков – один для грамположительных (Гр+), другой для грамотрицательных (Гр-) микроорганизмов (что соблюдается увы не во всех лабораториях).

Также наборы антибиотиков несколько отличаются в зависимости от источника происхождения – например, для культур из мочи обычно ставят дополнительно несколько препаратов-«уросептиков».

Если от животного выделено несколько культур микроорганизмов, чувствительность к АБ определяется индивидуально к каждой из них. Результаты лаборатория выдает по общепринятой градации: «Ч» — культура чувствительна к антибиотику; «П» — промежуточный уровень чувствительности; «У» — культура устойчива.

Также целесообразно определение чувствительности к бактериофагам – препаратам вирусной природы, имеющим ряд преимуществ по сравнению с антибиотиками, хорошо себя зарекомендовавшим в гуманной медицине. Существуют моновалентные и поливалентные бактериофаги.

В лабораториях обычно определяют чувствительность к трем бактериофагам – одному моновалентному (специфичному для конкретного возбудителя) и двум поливалентным, включающим комплекс фагов против нескольких видов бактерий. Без лабораторного определения чувствительность возбудителя к бактериофагам практически непредсказуема.

Фаг может «работать» очень хорошо, а может быть вообще не активным против данной культуры микроба.

Итак, по результатам лабораторного бактериологического исследования врач получает на руки информацию, необходимую для эффективного лечения конкретной инфекции. Традиционный подход (сначала лечим тем, что есть, потом диагностируем) постепенно уходит из практики.

Препараты широкого спектра, на которые привыкли надеяться лечащие врачи, все чаще дают сбои, в силу распространения высокоустойчивых штаммов.

Кроме того, лечение животного неспецифическим антибиотиком ведет к тому, что нормальная микрофлора организма сильно страдает, а патогенная флора адаптируется к антибиотикам, приобретает устойчивость, и вылечить такое животное в дальнейшем будет крайне сложно.

Очевидно что в экстренных случаях, при критических состояниях у врача нет времени дожидаться результатов анализов. Однако в остальных случаях потраченное на анализ время окупится гораздо быстрее, чем длительное лечение неэффективным препаратом.

Определение чувствительности грибов к противогрибковым препаратам (антимикотикам) также проводится в некоторых диагностических бак.лабораториях и имеет свои особенности, о чем Вы можете прочитать в соответствующем разделе сайта БакПосев-Вет.Ру.

Источник: www.bakposev-vet.ru

Источник: http://bakposev-vet.ru/antibiotiki/

Другие методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Тема: Ветеринарная вирусология  

Использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления лекарственной устойчивости микроорганизмов.

В последние годы ПЦР все чаще применяют для исследования различных свойств патогенных микроорганизмов, в том числе и для выявления лекарственной устойчивости. Как правило, использование ПЦР для определения чувствительности микроорганизмов целесообразно лишь в тех случаях, когда традиционные фенотипические методы неприменимы или недостаточно эффективны.

Для подобного анализа обычно используют ДНК или РНК возбудителя, выделенного в чистой культуре.

Однако в некоторых случаях имеется возможность прямого ПЦР-анализа на антибиотикорезистентность без предварительного культивирования возбудителя.

Исследуемый образец клинического материала при этом используют как источник ДНК-мишени для ПЦР, а откопированный ПЦР-продукт подвергается анализу с целью выявления мутаций, связанных с антибиотикорезистентностъю.

Преимуществами ПЦР помимо высокой специфичности и высокой чувствительности являются скорость и высокая производительность. Так, например, выделение, идентификация и определение лекарственной устойчивости у штаммов метициллинрезистентного S. aureus с помощью традиционных микробиологических методов требуют не менее 3…5 сут, в то время как ПЦР-анализ — менее чем сутки.

Существуют, однако, естественные ограничения для использования генетических методов оценки лекарственной устойчивости микроорганизмов: а) отсутствие данных о конкретных генетических механизмах резистентности; б) резистентность к определенным препаратам часто обусловлена с разными механизмами и мутациями в различных генах, которые независимо влияют на фенотип.

Например, резистентность грамотрицательных бактерий к аминогликозидным антибиотикам может быть вызвана продукцией различных аминогликозидмодифицирующих ферментов или изменением проницаемости клеточной стенки.

В этом случае результаты ПЦР-анализа, который всегда характеризует строго определенный специфический участок ДНК, не могут служить основанием для оценки чувствительности микроорганизмов в целом.

Использование тест-методов для определения антибиотикорезистентности микроорганизмов. Тест-методы — это рутинные приемы биологического, химического тестирования и индикации веществ и организмов с использованием простейших средств и методов.

Их применение целесообразно для определения антибиотикорезистентности микроорганизмов, так как хромосомная и плазмидная устойчивость в основном обусловлена функцией или модификацией белков.

У ряда кокков антибиотикорезистентностъ связана с модификацией участвующих в синтезе клеточной стенки пенициллинсвязывающих белков (ПСБ) — мишени действия β-лактамных антибиотиков, а у других бактерий — синтезом ферментов, инактивирующих препараты, — β-лактамаз и β-лактамаз расширенного спектра действия, аминогликозидмодифицирующих ферментов и других белковых субстанций.

Так, например, в последние годы за рубежом разработана и применяется диагностическая тест-система для латекс-агглютинации, позволяющая за 20 мин идентифицировать метициллинрезистентные штаммы S.

aureus; совпадение с детекцией устойчивости на агаре составило 93,6 %, а выявлением в ПЦР гена mecA — 98,5 %.

Кроме того, разработаны и диффузионные тест-методы (метод «двойных дисков» и Е-тесты) обнаружения у представителей семейства кишечных бактерий бета-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС).

Источник: http://www.activestudy.info/drugie-metody-opredeleniya-chuvstvitelnosti-mikroorganizmov-k-antibiotikam/

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Кое-какие возбудители инфекционных болезней со временем открытия антибиотиков мало поменяли темперамент первоначальной чувствительности к этим препаратам (стрептококки группы А, пневмококки, менингококки, бруцеллы, кое-какие сальмонеллы).

К тому же, большая часть патогенных микробов со временем купило устойчивость к обширно, подчас неконтролируемо и необоснованно используемым противомикробным средствам. Громаднейшее значение неприятность устойчивости микроорганизмов имеет в отношении стафилококков, шигелл, эшерихий, протея, среди которых антибиотикоустойчивые штаммы выделяются с громаднейшей частотой.

По степени чувствительности к основным антибиотикам микробы подразделяются на чувствительные, умеренно чувствительные и устойчивые.

В группу чувствительных входит большая часть штаммов микроорганизмов, рост которых на питательных средах заканчивается при применении концентраций, соответствующих средним терапевтическим дозам антибиотиков. Если он угнетается при применении лишь больших доз препаратов, то такие микробы умеренно чувствительны к антибиотику.

В случае если подавление роста достигается в опыте в лаборатории только при высоких концентрациях препарата, каковые нельзя создать в организме, то такие возбудители инфекции относятся к устойчивым к антибиотику.

Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существует ряд способов: способ последовательных разведений в жидкой питательной среде либо питательном агаре, способ диффузии в агар (способ дисков, насыщенных антибиотиками) и ускоренные способы. Способ дисков несложен, обширно употребляется, но дает только качественный ответ.

Более надежным и правильным количественным способом есть способ последовательных разведений антибиотиков в питательной среде в стандартных условиях опыта.

Как правило корреляция данных лабораторных изучений с клиническими не редкость достаточно полной, а терапия — действенной при изучении в динамике не только клинического течения процесса, но и вероятной смены возбудителя либо его чувствительности к антибиотикам.

Концентрация антибиотиков в тканях и жидкостях организма, как и их антимикробная активность, относятся к основным параметрам, определяющим эффективность антибиотикотерапии. При ее изучении наиболее обширно используют микробиологические способы изучения, основанные на способности антибиотика задерживать рост тест-микроба.

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы) в большинстве случаев используют:

• Способ диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроорганизм, а после этого вносят антибиотики. В большинстве случаев препараты вносят либо в особые лунки в агаре, либо на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками (способ дисков). Учет результатов выполняют через дни по наличию либо отсутствию роста микробов около лунок (дисков).

• Способ дисков — качественный и разрешает оценить, чувствителен либо устойчив микроорганизм к препарату.

• Способы определения минимальных ингибирующих и антибактериальных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который разрешает in vitro не допустить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует.

Это количественные способы, каковые разрешают вычислить дозу препарата, поскольку концентрация антибиотика в крови должна быть существенно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции.

Введение адекватных доз препарата нужно для действенного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.

Имеется ускоренные методы, с применением автоматических анализаторов.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам способом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар либо среду АГВ в чашке Петри.

Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на однообразном расстоянии друг от друга бумажные диски, которые содержат определенные дозы различных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру территорий задержки роста исследуемой культуры бактерий делают выводы о ее чувствительности к антибиотикам.

Для получения точных результатов нужно использовать стандартные диски и питательные среды, для контроля которых употребляются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.

Способ дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к не хорошо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (к примеру, полимиксин, ристомицин).

В случае если эти антибиотики предполагается применять для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов способом серийных разведений.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам способом серийных разведений. Данным способом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий.

Сначала готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл либо ЕД/мл) в особом растворителе либо буферном растворе.

Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), по окончании чего к каждому разведению додают 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10 6 —10 7 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры).

Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, по окончании чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой показывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам выполняют по особой готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров территорий задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, и значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

Читайте также:  Нитроксолин это антибиотик

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при применении простых доз антибиотиков.

К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении больших доз препарата.

Устойчивыми являются микробы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при применении максимально допустимых доз.

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека. В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости.

После этого в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий применяют обычный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli.

По окончании инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 направляться отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором благодаря расщепления глюкозы тест-бактериями.

Концентрация антибиотика определяется умножением громаднейшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий.

К примеру, в случае если большое разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равняется 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024х0,313=320 мкг/мл образовывает концентрацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу. В колбу с 0,5 мл дневной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри.

По окончании застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, по окончании чего отмечают результаты опыта.

О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу делают выводы по наличию роста стандартного штамма стафилококка около той либо другой исследуемой культуры (около диска).

Меню

Источник: http://modwear.ru/medicine/opredelenie-chuvstvitelnosti-mikroorganizmov-k.html

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные и методы разведения.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:

диффузионные методы

с использованием дисков с антибиотиками

с помощью Е-тестов

методы разведения

разведение в жидкой питательной среде (бульоне)

разведение в агаре

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о-37оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в …
миллиметрах (рис. 1).

Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом.

Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом.

Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2).

В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов.

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар.

Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов.

Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается.

Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) — наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде.

71. Принципы рациональной антибиотикотерапии.

Профилактика развития осложнений состоит, прежде всего, в соблюдении принципов рациональной антибиотикотерапии(антимик­робной химиотерапии):

Микробиологический принцип.До назна­чения препарата следует установить возбу­дителя инфекции и определить его индиви­дуальную чувствительность к антимикроб­ным химиотерапевтическим препаратам.

По результатам антибиотикограммы больному назначают препарат узкого спектра дейс­твия, обладающий наиболее выраженной активностью в отношении конкретного воз­будителя, в дозе, в 2—3 раза превышающей минимальную ингибирующую концентра­цию.

Если возбудитель пока неизвестен, то обычно назначают препараты более широ­кого спектра, активные в отношении всех возможных микробов, наиболее часто вы­зывающих данную патологию. Коррекцию лечения проводят с учетом результатов бактериологического исследования и опреде­ления индивидуальной чувствительности конкретного возбудителя (обычно через 2-3 дня).

Начинать лечение инфекции нужно как можно раньше (во-первых, в начале за­болевания микробов в организме меньше, во-вторых, препараты активнее действуют на растущих и размножающихся микробов).

Фармакологический принцип.Учитывают особенности препарата — его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания препаратов и т. п.

Дозы препаратов должны быть достаточными для того, чтобы обеспечить в биологических жидкостях и тка­нях микробостатические или микробоцидные концентрации.

Необходимо представлять оп­тимальную продолжительность лечения, так как клиническое улучшение не является основанием для отмены препарата, потому что в организме могут сохраняться возбудители и может быть рецидив болезни.

Учитывают также оптимальные пути введения препарата, так как многие антибиотики плохо всасываются из ЖКТ или не проникают через гематоэнцефалический барьер.

• Клинический принцип.

При назначении пре­парата учитывают, насколько безопасным он бу­дет для данного пациента, что зависит от ин­дивидуальных особенностей состояния больного (тяжесть инфекции, иммунный статус, пол, на­личие беременности, возраст, состояние функции печени и почек, сопутствующие заболевания и т.п.) При тяжелых, угрожающих жизни инфекциях особое значение имеет своевременная антибиотикотерапия. Таким пациентам назначают комбинации из двух-трех препаратов, чтобы обес­печить максимально широкий спектр действия. При назначении комбинации из нескольких пре­паратов следует знать, насколько эффективным против возбудителя и безопасным для пациента будет сочетание данных препаратов, т. е. чтобы не было антагонизма лекарственных средств в отно­шении антибактериальной активности и не было суммирования их токсических эффектов.

Эпидемиологический принцип.

Выбор пре­парата, особенно для стационарного больно­го, должен учитывать состояние резистент­ности микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже ре­гионе.

Следует помнить, что антибиотикорезистентность может не только приобретаться, но и теряться, при этом восстанавливается природная чувствительность микроорганизма к препарату. Не изменяется только природная устойчивость.

Фармацевтический принцип.Необходимо учитывать срок годности и соблюдать правила храненияпрепарата, так как при нарушении этих правил антибиотик может не только по­терять свою активность, но и стать токсич­ным за счет деградации. Немаловажна также и стоимостьпрепарата.

71. Лекарственная устойчивость микроорганизмов и механизм ее возникновения. Понятие о госпитальных штаммах микроорганизмов. Пути преодоления лекарственной устойчивости.

Антибиотикорезистентность — это устойчи­вость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистент­ными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме. Резистентность может быть природной и приобретенной.

Природная устойчивость.

Некоторые виды микробов природно ус­тойчивы к определенным семействам антиби­отиков или в результате отсутствия соответс­твующей мишени (например, микоплазмы не имеют клеточной стенки, поэтому не чувстви­тельны ко всем препаратам, действующим на этом уровне), или в результате бактериальной непроницаемости для данного препарата (на­пример, грамотрицательные микробы менее проницаемы для крупномолекулярных соеди­нений, чем грамположительные бактерии, так как их наружная мембрана имеет «маленькие» поры).

Приобретенная устойчивость. Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды.

Генетические основы приобретенной резис­тентности. Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживается генами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях. Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в попу­ляции бактерий в результате:

мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующей селекцией (т. е. отбором) му­тантов.Особенно легко селекция происходит в присутствии антибиотиков, так как в этих условиях мутанты получают преимущество перед остальными клетками популяции, ко­торые чувствительны к препарату.

Мутации возникают независимо от применения анти­биотика, т. е. сам препарат не влияет на час­тоту мутаций и не является их причиной, но служит фактором отбора.

Далее резистентные клетки дают потомство и могут передаваться в организм следующего хозяина (человека или животного), формируя и распространяя ре­зистентные штаммы.

Мутации могут быть: 1) единичные (если мутация произошла в одной клетке, в результате чего в ней синтезируются измененные белки) и 2) множественные (се­рия мутаций, в результате чего изменяется не один, а целый набор белков, например пенициллинсвязывающих белков у пенициллин-резистентного пневмококка);

переноса трансмиссивных плазмид резис­тентности (R-плазмид).Плазмиды резистен­тности (трансмиссивные) обычно кодируют перекрестную устойчивость к нескольким семействам антибиотиков.

Впервые такая множественная резистентность была описа­на японскими исследователями в отношении кишечных бактерий. Сейчас показано, что она встречается и у других групп бактерий.

Некоторые плазмиды могут передаваться меж­ду бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга.

Например, бета-лактамаза, кодируемая плазмидой ТЕМ-1, широко распространена уграмотрицательных бактерий и встречается укишечной палочки и других кишечных бактерий, а также у гонококка, резистентного кпенициллину, и гемофильной палочки, резис­тентной к ампициллину;

переноса транспозонов, несущих r-гены(или мигрирующих генетических последова­тельностей). Транспозоны могут мигрировать с хромосомы на плазмиду и обратно, а также с плазмиды на другую плазмиду. Таким образом, гены резистентности могут передаваться да­лее дочерним клеткам или при рекомбинации другим бактериям-реципиентам.

Реализация приобретенной устойчивости. Изменения в геноме бактерий приводят к тому, что меняются и некоторые свойства бактериальной клетки, в результате чего она становится устойчивой к антибактериальным препаратам.

Обычно антимикробный эффект препарата осуществляется таким образом: агент должен связаться с бактерией и прой­ти сквозь ее оболочку, затем он должен быть доставлен к месту действия, после чего пре­парат взаимодействует с внутриклеточными мишенями.

Реализация приобретенной ле­карственной устойчивости возможна на каж­дом из следующих этапов:

модификация мишени.Фермент-мишень может быть так изменен, что его функции не нарушаются, но способность связываться с химиопрепаратом (аффинность) резко сни­жается или может быть включен «обходной путь» метаболизма, т. е. в клетке активируется другой фермент, который не подвержен дейс­твию данного препарата.

«недоступность» мишениза счет сниже­ния проницаемости клеточной стенки и кле­точных мембран или «эффлюко»-механизма, когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик.

инактивация препарата бактериальными ферментами.

Некоторые бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые де­лают препараты неактивными (например, бета-лактамазы, аминогликозид-модифицирующие ферменты, хлорамфениколацетилтрансфераза).

Бета-лактамазы — это ферменты, разруша­ющие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Гены, кодирующие эти ферменты, широко распространены среди бактерий и могут быть как в составе хромосо­мы, так и в составе плазмиды.

Для борьбы с инактивирующим действием бета-лактамаз используют вещества — ин­гибиторы (например, клавулановую кисло­ту, сульбактам, тазобактам).

Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушитель­ное действие на бета-лактамы. При этом собственная антибактериальная активность таких ингибиторов низкая.

Клавулановая кислота ингибирует большинство известных бета-лактамаз. Ее комбинируют с пенициллинами: амоксициллином, тикарциллином, пиперациллином.

Предупредить развитие антибиотикорезистентности у бактерий практически не­возможно, но необходимо использовать антимикробные препараты таким образом, чтобы не способствовать развитию и рас­пространению устойчивости (в частности, применять антибиотики строго по показа­ниям, избегать их использования с профи­лактической целью, через 10—15 дней антибиотикотерапии менять препарат, по воз­можности использовать препараты узкого спектра действия, ограниченно применять антибиотики в ветеринарии и не использо­вать их как фактор роста).

Читайте также:  Капли для глаз с антибиотиком широкого спектра действия

Внутрибольничная инфекция— это инфекция, зара­жение которой происходит в больничных учреждениях: наслаиваясь на основное за­болевание, она утяжеляет клиническое те­чение болезни, затрудняет диагностику и лечение, ухудшает прогноз и исход заболе­вания, нередко приводя к смерти больного.

Внутрибольничная инфекция (ВБИ) явля­ется одной из форм ятрогенных, т. е. связан­ных с медицинскими вмешательствами, за­болеваний.

Возбудителями ВБИмогут быть патогенные микробы, например, в случаях госпитализации инфекционного больного в соматические отделения, неправильной или несовершенной изоляции больных в инфекционных отделениях, заноса возбу­дителей в больницы посетителями во время эпидемий.

Источник: http://refac.ru/metody-opredeleniya-chuvstvitelnosti-k-antibiotikam/

Методы определения активности антибиотиков и чувствительности к ним микроорганизмов. Кафедра лабораторной диагностики ИПО БГМУ Цветкова А.В. — презентация

1 Методы определения активности антибиотиков и чувствительности к ним микроорганизмов. Кафедра лабораторной диагностики ИПО БГМУ Цветкова А.В.<\p>

2 Определение антибиотикорезистентности Задачи проведения исследований по оценке антибиотикорезистентности: 1. Обоснование назначения оптимальной индивидуальной антибиотикотерапии у конкретного больного. 2.

Обоснование эмпирической антибиотикотерапии на основании данных эпидемиологического мониторинга за уровнем антибиотикорезистентности м/о, циркулирующих в конкретных регионах или учреждениях<\p>

3 Определение антибиотикорезистентности Этапы проведения исследований: 1. Оценка целесообразности изучения антибиотикорезистентности выделенного м/о 2.

Выбор антибактериальных препаратов, подлежащих включению в исследование. 3. Выбор методов проведения исследования и контроля качества. 4. Интерпретация результатов исследования и выдача рекомендаций по лечению.<\p>

4 Определение антибиотикорезистентности 1 этап.

Показания для проведения исследований: Если уровень устойчивости м/о к антибактериальным препаратам не может быть предсказан на основании данных идентификации. Все м/о, выделенные из стерильных локусов. Если выделенный м/о относится к таксономической группе, для которой характерна высокая частота распространения приобретенной устойчивости.

<\p>

5 Определение антибиотикорезистентности 2 этап. Выбор антибактериальных препаратов, подлежащих включению в исследование. На основе данных о природной устойчивости м/о и клинической эффективности антибиотиков. С учетом фармакокинетических, токсикологических параметров препарата. С учетом локализации и тяжести инфекции.<\p>

6 Определение антибиотикорезистетности 3 этап.

Выбор методов проведения исследования и контроля качества Влияют: Точность Воспроизводимость Трудоемкость стоимость<\p>

7 Определение антибиотикорезистентности 3 этап. Выбор методов проведения исследования и контроля качества.

Методы Диффу- зионные Диско- диффузионный Е-тест Серийных разведений Макрометод Микрометод<\p>

8 Определение антибиотикорезистентности Методические указания МУК «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам»<\p>

9 Определение антибиотикорезистентности. Метод серийных разведений.

Основан на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибиотика- величины минимальной подавляющей концентрации (МПК). МПК- минимальная концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма.<\p>

10 Определение антибиотикорезистентности. Метод серийных разведений.

В зависимости от характера питательной среды различают метод серийных разведений в агаре в бульоне В зависимости от объема используемой питательной среды: Макрометод Микрометод<\p>

11 Определение антибиотикорезистентности. Метод серийных разведений. Этапы: 1. Приготовление растворов антибиотиков (а/б) 2. Приготовление ПС с растворами а/б 3.

Приготовление суспензии исследуемого микроорганизма, ее стандартизация и инокуляция 4. Инкубация 5. Учет результатов 6. Интерпретация<\p>

12 Расчет навески АБП для приготовления базового раствора С (мкг/мл) x Vтеор. (мл) m АБтеор. (мг) = , А (содержание АБП в мкг/мг) где: m АБтеор. — расчетная (теоретическая) навеска АБП; С — необходимая концентрация АБП; Vтеор.

— объем растворителя для растворения теоретической навески; А — активность АБП (количество активного вещества, содержащегося в субстанции).<\p>

13 Расчет необходимого количества растворителя m АБпракт. (мг) x Vпракт. (мл) Vпракт. (мл) = , m АБтеор. (мг) где: Vпракт. — объем растворителя для растворения практической навески; m АБпракт. — полученная навеска АБП; m АБтеор.

— расчетная (теоретическая) навеска АБП; Vтеор. — объем растворителя для растворения теоретической навески.<\p>

14 Растворители и разбавители, используемые для приготовления основных растворов АБП Для приготовления основных растворов АБП необходимо использовать субстанции АБП с известной активностью.

Для взвешивания субстанций необходимо использовать электронные лабораторные весы с точностью до 4 знака. для измерения объемов — калиброванные дозаторы и пипетки. Основные растворы АБП готовят в концентрации 1000,0 мкг/мл и выше.<\p>

15 Определение антибиотикорезистентности. Метод серийных разведений.

Приготовление суспензии исследуемого микроорганизма, ее стандартизация и инокуляция: Используется суточная культура исследуемых м/о. Концентрация 1,5*10 8 КОЕ/мл, что соответствует степени мутности 0,5 стандарта Мак-Фарланда.<\p>

16 Определение антибиотикорезистентности. Метод серийных разведений.<\p>

17 Определение антибиотикорезистентности.

Метод серийных разведений Учет результатов Визуально Спектрофотометрически<\p>

18 Контроль качества Контроль роста культуры в среде без АБП. Контроль чистоты суспензии микроорганизма, использованной для инокуляции, путем высева на неселективные среды.

Каждая партия тестируемых штаммов сопровождается внутренним контролем качества исследования с использованием соответствующих контрольных (референтных) штаммов.

<\p>

19 Замечания по методу серийных разведений Необходимо использовать субстанции антибиотиков с известным уровнем активности, Строго соблюдать режимы хранения, Тщательно выполнять контроль качества питательных сред, Трудоемкость приготовления рабочих растворов антибиотиков.

<\p>

20 Вывод Использование тест-систем на основе метода микро разведений позволяет избегать трудоемких процедур по стандартизации подготовительных этапов, но при этом обеспечивает получение достоверных количественных результатов по уровню антибиотикорезистентности.

Весьма экономичным и простым в исполнении является также вариант метода серийных микро разведений, основанный на использовании двух пороговых концентраций, позволяющий получить качественные результаты<\p>

21 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод.

Основан на диффузии антибиотика с бумажного носителя в агар с исследуемым микроорганизмом и формировании зоны ингибиции роста чувствительных микроорганизмов.<\p>

22 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод. Этапы: 1. Приготовление ПС 2. Приготовление суспензии исследуемого микроорганизма 3. Нанесение инокулюма на поверхность ПС 4.

Наложение дисков с антибиотиками 5. Инкубация 6. Учет результатов 7. Интерпретация<\p>

23 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод. Приготовление ПС. Используются: Агар Мюллер-Хинтона АГВ Толщина слоя агара 4 мм(на чашку диам. 100 мм требуется 25 мл агара, на чашку диам. 90 мм – 20). Чашки подсушенные Чашки предпочтительнее использовать немедленно.

Допускается хранение в запаянных полиэтиленовых пакетах в холодильнике при 4-8 C* в течение 5 сут.<\p>

24 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод. Приготовление суспензии исследуемого микроорганизма: Используется суточная культура исследуемых м/о. Концентрация 1,5*10 8 КОЕ/мл, что соответствует степени мутности 0,5 стандарта Мак-Фарланда.

<\p>

25 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод. Нанесение инокулюма на поверхность ПС: Производится с помощью ватных тампонов- помещение в инокулюм, отжим о стенки пробирки и высев на ПС штриховыми движениями<\p>

26 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод.

Наложение дисков с а/б: В течении 15 минут Срок годности дисков Соблюдение контроля качества дисков<\p>

27 Октодиски<\p>

28 Аппликация дисков Флаконы с дисками следует извлекать из холодильника за 1 ч до начала работы Аппликацию дисков проводят с помощью стерильного пинцета или автоматического диспенсера. Расстояние от диска до края чашки и между дисками должно быть мм.

На одну чашку диаметром 100 мм следует помещать не более 6 дисков с АБП. Диски должны равномерно контактировать с поверхностью агара, для чего их следует аккуратно прижать пинцетом.<\p>

29 Диско-диффузионный метод. Диспенсоры<\p>

30<\p>

31 Определение антибиотикорезистентности. Диско-диффузионный метод. Инкубация<\p>

32 Определение антибиотикорезистентности.

Диско-диффузионный метод. Учет результатов По измерению зоны ингибиции роста м/о помещают кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 45 град.

Диаметр зон задержки роста измеряют с точностью до 1 мм<\p>

33 Измерение зоны ингибиции Линейка лекало<\p>

34 Контроль качества определения чувствительности Внутренний контроль качества исследования.

Достоверность результатов исследования чувствительности микроорганизмов к АБП зависит от следующих основных параметров: состава питательной среды; соответствия реальной активности используемых антибиотиков (или их содержания в дисках) паспортным характеристикам соблюдения стандартности выполнения всех лабораторных процедур.<\p>

35 Определение антибиотикорезистентности.

Е-тест модификация диско-диффузионного метода. используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной 15 разведений антибиотика размещены с помощью инновационной технологии сухой химии на пластмассовой полоске.

В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).<\p>

36 Определение антибиотикорезистентности.

Е-тест<\p>

37 Е-тест<\p>

38 Автоматизированные системы<\p>

39 БЛРС БЛРС- термин объединяет большое число бактериальных ферментов, отличающихся способностью расщеплять оксиимино-в-лактамы наряду с пенициллинами и ранними цефалоспоринами и проявляют чувствительность к ингибиторам (клавулановой кислоте, сульбактаму и тазобактаму).

<\p>

40 Выявление БЛРС у штаммов Enterobacteriaceae только на штаммы Klebsiella spp. и E. coli. Стандартные диски цефотаксима и цефтазидима (30 мкг) или диска с цефподоксимом (10 мкг), а также диски, содержащие комбинации: цефотаксим + клавуланат или цефтазидим + клавуланат (30/10 мкг) или цефподоксим + клавуланат (10/10 мкг).

В исследование целесообразно включать одновременно и диски с цефотаксимом и диски с цефтазидимом и их комбинациями с клавуланатом.<\p>

41 Выявление БЛРС у штаммов Enterobacteriaceae Методика приготовления микробной взвеси и инокуляции чашек с агаром стандартные. На поверхность агара накладывают диски с цефалоспоринами и их комбинациями с клавулановой кислотой.

Чашки инкубируют в термостате при 35 град. C в течение ч.<\p>

42 Интерпретация результатов Различие в диаметрах зон подавления роста для дисков с цефподоксимом/клавулановой кислотой и цефподоксимом на 6 мм и более, для дисков с цефотаксимом/клавулановой кислотой и цефотаксимом, цефтазидимом/клавулановой кислотой и цефтазидимом — на 5 мм и более свидетельствует о продукции штаммом БЛРС. Необходимо подчеркнуть, что результат считается положительным, если указанные различия получены хотя бы для одной пары дисков.<\p>

43 Метод двойных дисков Метод предполагает использование доступных коммерческих дисков с цефалоспоринами III поколения и с амоксициллином/клавуланатом. Метод «двойных дисков» представляет собой вариант классического ДДМ определения чувствительности, который позволяет выявить продукцию БЛРС по наличию расширенной зоны подавления роста вокруг диска с каким-либо цефалоспорином III поколения напротив диска, содержащего клавулановую кислоту (синергизм отмечается в участке пересечения зон диффузии двух дисков, расположенных на небольшом расстоянии друг от друга).<\p>

44 Метод двойных дисков Методика приготовления микробной взвеси, инокуляции и инкубации чашек не имеет отличий от стандартного ДДМ. Особенностью метода является то, что через мин. после инокуляции на поверхность агара накладывают диски с АБП: в центр — диск, содержащий клавулановую кислоту, обычно в виде комбинации амоксициллин/клавуланат (20/10 мкг), по бокам от него на расстоянии 20 и 30 мм между центрами дисков — диски с цефтазидимом (30 мкг) и цефотаксимом (30 мкг). Использование двух дисков каждого АБП, расположенных на разном расстоянии от диска с клавулановой кислотой, позволяет повысить эффективность обнаружения БЛРС.<\p>

45 Интерпретация результатов Если тестируемый микроорганизм вырабатывает БЛРС (действие которых в большинстве случаев обратимо клавуланатом), зона подавления роста вокруг диска с цефалоспорином III поколения окажется «вытянутой» в сторону диска с амоксициллином/клавуланатом. Причиной данного эффекта является дополнительное подавление роста микроорганизма в той зоне, куда диффундируют и клавуланат и цефалоспорин III поколения. Тест сугубо качественный и требует определенных навыков при интерпретации.<\p>

46 КРИТЕРИИ ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ S. PNEUMONIAE: Антибактери- альные препараты Содержание в диске (мкг) Диаметр зон подавления роста (мм) РПЧ Эритромицин 15

47 Антимикробные препараты Группы микроорганизмов по видовым отличиям по отношению к антимикробным препаратам: Энтеробактерии Неферментирующие бактерии Стафилококки Энтерококки Стрептококки Гемофильная палочка Гонококки М/о со сложными пит. потребностями<\p>

48 Enterobacteriaceae Самостоятельные наборы необходимы для: м/о, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях различной локализации Возбудителей кишечных инфекций м/о, выделенных при инфекциях МПС<\p>

49 М/о, выделенные при гнойно- воспалительных заболеваниях различной локализации Аминопенициллины Защищенные аминопенициллины Цефалоспорины III поколения Цефтазидим Аминогликозид Фторхинолон Дополнительно Имипенем или меропенем Цефепим, амикацин Цефоперазон/сульбактам Цефуроксим<\p>

50 Возбудители кишечных инфекций Ампициллин Ко-тримоксазол Норфлоксацин или Ципрофлоксацин или Офлоксацин Цефотаксим Дополнительно Цефотаксим или цефтриаксон Тетрациклин или доксициклин хлорамфеникол<\p>

51 Неферментеры Цефтазидим Цефепим Имепенем или меропенем Аминогликозиды Амикацин Ципрофлоксацин Дополнительно Цефоперазон Азтреонам Цефалоспорины IУ поколения Тобрамицин Тикарциллин/клавуланат<\p>

52 Стафилококки Оксациллин Защищенные пенициллины Макролиды Линкозамиды Тетрациклины Аминогликозиды Хлорамфеникол Ванкомицин Фузидин нитрофураны<\p>

53 Энтерококки Ампициллин Стрептомицин Гентамицин Ванкомицин линезолид Ципрофлоксацин Норфлоксацин фосфомицин нитрофурантоин<\p>

54 Пневмококки В-лактамы Макролиды Линкозамиды Ко-тримоксазол Хлорамфеникол Тетрациклины ванкомицин<\p>

55 Контрольные штаммы Для энтеробактерий: E. coli ATCC P. aeruginosa ATCC Для НФБ — P. aeruginosa ATCC Для стафилококков S. aureus ATCC cер. развед., ATCC для ДДМ Для энтерококков E. faecalis ATCC для сер.разв., S. aureus ATCC для ДДМ Для пневмококков S. pneumoniae ATCC 46619<\p>

56 Спасибо за в нимание !<\p>

Источник: http://www.myshared.ru/slide/1270475/

Ссылка на основную публикацию